EDQM издал рекомендации о контроле вакцин с вирусным вектором

04 Листопада 2020 5:03 Поділитися

Европейский директорат по качеству лекарственных средств и здравоохранения (European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare — EDQM) подготовил проект экспертного заключения о контроле вакцин с вирусным вектором (Recombinant viral vectored vaccines for human use) в поддержку разработчиков, которые в настоящее время работают над кандидатами вакцин против COVID-19 на основе этой технологии.

При разработке вакцин против COVID-19 оценивается широкий спектр технологий — от традиционных подходов, таких как живые ослабленные и инактивированные вакцины, до более современных технологий, таких как вакцины на основе нуклеиновых кислот и рекомбинантные вирусные вакцины на основе векторов. В стремлении заполнить пробелы в экспертных оценках EDQM привлек группу экспертов Европейской Фармакопеи (European Pharmacopoeia — Ph. Eur.) по вакцинам для использования человеком (15-ю группу), объединяющую экспертов из регуляторных органов, национальных контрольных лабораторий, научных кругов и промышленности Европы и других стран (Управление по контролю за пищевыми продуктами и лекарственными средствами США (Food and Drug Administration — FDA), Управление по контролю за оборотом лекарственных средств и изделий медицинского назначения Австралии (Therapeutic Goods Administration — TGA), министерство здравоохранения Канады (Health Canada)).

В проекте документа предоставлены варианты аналитической стратегии для контроля рекомбинантных вакцин на основе вирусного вектора, включая описание тестов, которые могут проводиться на каждом этапе производства вакцин против COVID-19. Их пригодность следует оценивать в индивидуальном порядке, в зависимости от природы векторной основы и/или конкретного производственного процесса. Принципы, описанные в этом документе, также могут быть использованы в разработке других вакцин на основе векторов.

  1. Две разновидности векторных вакцин

Вакцины с вирусным вектором представляют собой живые вирусы, созданные с помощью генной инженерии для экспрессии одного или нескольких гетерологичных антигенов. В своем экспертном заключении EDQM рассмотрел как репликационно-компетентные, так и дефектно-репликационные вакцины с вирусным вектором. Способные реплицироваться в организме человека вакцины с вирусным вектором несут вирусы желтой лихорадки, кори, везикулярного стоматита (VSV) или гриппа в качестве основы. Вирусные вакцины с дефектом репликации в качестве вектора несут аденовирус, модифицированный вирус осповакцины Анкара (vaccinia virus Ankara — MVA) или гриппа.

  1. Субстраты для векторов

Векторы можно размножать в диплоидных клетках человека (Ph. Eur. 5.2.3), в непрерывных клеточных линиях (Ph. Eur. 5.2.3), в клетках куриного эмбриона или в амниотической полости эмбрионов, полученных из популяции кур, свободных от определенных патогенов (Ph. Eur. 5.2.2). В главе 5.2.3 Ph. Eur. приведен список тестов, которые можно проводить на диплоидных клетках человека и клеточных линиях (в системе банка клеток).

Для некоторых вирусов с дефектом репликации, например, аденовирусных векторов, могут потребоваться тесты на способность к репликации. Возникновение репликационно-компетентных вирусных векторов особенно вероятно при существовании крупных гомологичных областей между вирусным геномом и геномом клеток комплементации (complementation cells). Это явление можно свести к минимуму, устранив гомологию между обоими геномами. Так, для производства рекомендуют использование клеток без гомологических последовательностей с вектором.

  1. Посевные культуры вирусных векторов

Производство рекомбинантного вектора обычно основано на системе посевных культур (seed lot). Анализ риска проводят на основании характера вирусного вектора и доклинических исследований безопасности (например биораспределения). При этом используемый штамм вируса идентифицируется по информации о его происхождении и его последующих манипуляциях. При необходимости могут быть проведены тесты на висцеротропизм и/или нейротропизм и нейровирулентность на подходящей животной модели.

Указанные ниже тесты могут быть рассмотрены для контроля посевной культуры.

3-1. Идентификация. Вектор идентифицируется в основной и каждой рабочей посевной культуре подходящими методами, такими как иммунохимические (Ph. Eur. 2.7.1) или NAT (Ph. Eur. 2.6.21).

3-2. Генетическая и фенотипическая характеристика. Можно рассмотреть следующие тесты.

3-3. Титр инфекционного вектора и концентрация частиц.

3-4. Посторонние агенты (Ph. Eur. 2.6.16). Основная и каждая рабочая посевная культура проходят испытания на наличие посторонних агентов. В главе 2.6.16 Ph. Eur. приведен список тестов, которые могут проводиться с целью оценки риска.

3-5. Отсутствие репликационно-компетентных вирусных векторов. Для некоторых нереплицирующихся вирусных векторов, например, аденовирусов, репликационно-компетентные вирусные векторы могут развиваться путем гомологичной рекомбинации между рекомбинантной вирусной ДНК и последовательностями вирусного вектора, интегрированными в геном клеток комплементации.

Выявление компетентных к репликации вирусных векторов обычно выполняется с помощью анализа инфекционности на линиях чувствительных детекторных клеток, которые не способны комплементировать гены, удаленные из вектора.

  1. Размножение

Желательно, чтобы продукт не содержал антибиотиков. Если не обосновано иное, ни на одном этапе производства не следует использовать пенициллин или стрептомицин. Часть культур клеток-продуцентов оставляют как неинфицированные (контрольные) клетки. Если вирус размножают в зародышевых клетках, часть яиц оставляют незараженными для контроля.

Следующие ниже тесты могут быть рассмотрены для контроля каждой серии воспроизводства.

4-1. Идентификация. Рекомбинантный вектор, включающий генетическую вставку, идентифицируется подходящими методами, такими как иммунохимические (Ph. Eur. 2.7.1) или NAT (Ph. Eur. 2.6.21)

4-2. Концентрация векторных частиц. Для некоторых векторов, например, аденовирусных, концентрацию векторных частиц в единичных сборах определяют подходящим методом (например qPCR (Ph. Eur. 2.6.21)).

4-3. Титр инфекционного вектора. Определяют после инокуляции в клеточные культуры с использованием подходящей методики.

4-4. Посторонние агенты (Ph. Eur. 2.6.16).

4-5. Контрольные клетки или яйца. Контрольные клетки и контрольные яйца тестируют на наличие посторонних агентов (Ph. Eur. 2.6.16).

Если для производства используются диплоидные клетки человека или непрерывные клеточные линии, контрольные клетки должны соответствовать требованиям теста идентификации (Ph. Eur. 5.2.3).

Контроль примесей

Указанные ниже тесты могут быть рассмотрены с этой целью.

5-1. Идентификация. Рекомбинантный вектор, включающий генетическую вставку, идентифицируется подходящими методами, такими как иммунохимические (Ph. Eur. 2.7.1), NAT (Ph. Eur. 2.6.21) или жидкостная хроматография (Ph. Eur. 2.2.29).

5-2. Концентрация векторных частиц. Для некоторых векторов, например, аденовирусов, концентрацию частиц определяют подходящим методом (например qPCR (Ph. Eur. 2.6.21)).

5-3. Титр инфекционного вектора. Титр инфекционного вектора определяется после инокуляции в клеточные культуры с использованием подходящей методики, например, анализа бляшек или анализа CCID50, который может использовать иммуноокрашивание или молекулярное считывание, такое как qPCR, или проточную цитометрию (Ph. Eur. 2.7.24) или анализ флуоресцентного фокуса.

5-5. Отношение титра инфекционного вектора к концентрации общего белка.

5-6. Экспрессия продукта генетической вставки.

5-7. Остаточный белок клетки-хозяина.

5-8. Остаточная ДНК клетки-хозяина (Ph. Eur. 2.6.35).

5-9. Векторные агрегаты.

5-10. Остаточные реагенты.

5-11. Остаточные антибиотики.

5-12. Отсутствие репликационно-компетентного вирусного вектора: необходимо оценить способность к возобновлению репликации.

5-13. Микробиологический контроль.

5-14. Бактериальные эндотоксины (Ph. Eur. 2.6.14).

  1. На стадии in bulk

6-1. Микробиологический контроль. Микробиологическое качество конечной массы контролируется либо посредством бионагрузочных испытаний (при условии, что стерилизующая фильтрация выполняется на более поздней стадии производственного процесса, то есть при розливе), либо посредством теста на стерильность (Ph. Eur. 2.6.1). Некоторые вирусные векторы, такие как векторы, использующие поксвирус в качестве основы, не фильтруются и требуют обработки в асептических условиях.

6-2. Противомикробная сохранность. Для многодозовых жидких препаратов оценивается с учетом вероятного загрязнения в течение максимального рекомендуемого периода использования (период эксплуатации).

  1. Окончательный контроль

Следующие тесты могут быть рассмотрены для контроля готовой партии.

7-1. Идентификация. Кроме того, продукт проверяют на степень опалесценции (Ph. Eur. 2.2.1), окрашивания (Ph. Eur. 2.2.2) и наличие видимых частиц (Ph. Eur. 2.9.20)

7-3. Осмоляльность (Ph. Eur. 2.2.35): в пределах, установленных для конкретного препарата.

7-4. Кислотность (pH) (Ph. Eur. 2.2.3).

7-5. Извлекаемый объем (Ph. Eur. 2.9.17).

7-6. Остаточная влажность (Ph. Eur. 2.5.12): в пределах, установленных для конкретного лиофилизированного препарата.

7-7. Противомикробный консервант.

7-8. Бычий сывороточный альбумин, если использовалась бычья сыворотка.

7-9. Овальбумин.

7-10. Векторные агрегаты.

7-11. Стерильность (Ph. Eur. 2.6.1).

7-12. Бактериальные эндотоксины (Ph. Eur. 2.6.14): меньше предела, установленного для конкретного препарата.

7-13. Испытание на термическую стабильность.

7-14. Концентрация векторных частиц.

7-15. Сила действия (титр инфекционного вектора; отношение концентрации векторных частиц к титру инфекционного вектора; экспрессия продукта генетической вставки).

Изложенные в данном необязательном для исполнения документе рекомендации собираются обновлять, чтобы адаптировать к развивающейся ситуации и учитывать опыт работы с новыми компонентами или продуктами. Воспроизвести указанные параметры в процессе разработки — крупная и сложная задача для создателей вакцин.

По материалам edqm.eu

 

Коментарі

Коментарі до цього матеріалу відсутні. Прокоментуйте першим

Добавить свой

Ваша e-mail адреса не оприлюднюватиметься. Обов’язкові поля позначені *

*

Останні новини та статті